期刊简介
本刊是由中华人民共和国教育部主管，四川大学华西医学中心及华西医院主办的专业性学术期刊,中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊。其办刊宗旨是：尊重学术自由，提倡学术争鸣，鼓励学术创新，促进学术交流。主要以述评、论著、论著摘要、病案报道、临床病理讨论、影像学诊断分析、综述与讲座、学术动态与通讯及国外进展等形式，报道国内外呼吸与危重医学领域领先的科研成果和临床诊疗经验，以及对临床有指导作用，且与临床密切结合的基础理论研究。每期常设栏目为：慢性阻塞性肺疾病(COPD)，哮喘与气道炎症，急性肺损伤机械通气，睡眠与呼吸，感染性疾病，肿瘤，危重监护等。根据杂志全年报道计划，每期开设l-2个重点栏目。主要读者对象为呼吸与危重医学及相关专业的临床医生、护理工作者及科研工作者。
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首页>中国呼吸与危重监护杂志
- 杂志名称：中国呼吸与危重监护杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：四川大学华西医学中心,四川大学华西医院
- 国际刊号：1671-6205
- 国内刊号：51-1631/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：美国《化学文摘》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 维普收录(中), 剑桥科学文摘, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰)
靶向小鼠核因子κB P65的小干扰RNA逆转录病毒载体的构建与鉴定
靳丽妍；朱光发；吴春婷；闫树凤
关键词：急性肺损伤, 核因子κB, RNA干扰, 逆转录病毒载体
摘要：目的 构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体，鉴定其生物学效应。方法 采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体，转染293E细胞，包装成逆转录病毒，以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1，用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激，在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达，并用RT-PCR和ELISA方法 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果 成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制，2 h即明显低于Scramble病毒组(0.91±0.03比1.02±0.02,P＜0.01)，此后持续降低；在LPS刺激后的24、36、48和72 h，siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组(0.97±0.02比1.01±0.01，0.94±0.01比1.02±0.01，0.94±0.02比1.02±0.01，0.93±0.01比1.00±0.02，P＜0.05)。LPS刺激后2、6、12和24h，siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(P＜0.01)，而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组(P＜0.01)。结论 将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法 是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后，可以减少其下游炎症因子的释放，提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。
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